蛋白质质量分数的测定方法需根据检测对象(如血液、尿液等)和精度要求选择,以下是常用方法及操作要点:
一、临床常用方法
凯氏定氮法 - 原理:
通过高温消化样品中的蛋白质,使氮元素转化为氨,再通过蒸馏回收氮量,从而计算蛋白质含量。
- 步骤:
1. 取适量样品于凯氏烧瓶中,加入硫酸钾-硫酸铜消化液(K₂SO₄·CuSO₄)和浓硫酸,高温消化后蒸馏回收氮气。
2. 根据氮含量计算蛋白质质量(公式:蛋白质质量 = 氮含量×6.25)。
- 特点:
- 精度高,适合临床定量分析。
双缩脲法 - 原理:
蛋白质与双缩脲试剂(0.1g/mL NaOH + 0.01g/mL CuSO₄)反应生成紫色络合物,颜色深浅与蛋白质浓度正相关。
- 操作步骤:
1. 取血清或尿液样本,加入硫酸钠调节pH至碱性,再加入双缩脲试剂。
2. 搅拌后静置10分钟,观察颜色变化(紫色深浅反映浓度)。
- 特点:
- 快速(20-30分钟),适合常规检测。
二、其他方法
紫外吸收法 - 原理:
蛋白质在280nm处有特征吸收峰,通过测量吸光度计算浓度。
- 特点:
- 敏感度高,5-10分钟可出结果。
酚试剂法 - 原理:
蛋白质与酚类试剂反应生成有色络合物,颜色深浅与含量相关。
- 特点:
- 操作简单,但耗时较长。
三、注意事项
样品处理:需避免样本污染,液体样本需充分混匀,固体样本需研磨过筛。
仪器要求:凯氏定氮法需高温设备,双缩脲法需控温环境。
结果校准:双缩脲法建议绘制标准曲线以提高准确性。
四、正常范围参考
血清蛋白质:成人正常值35-55g/L。
24小时尿蛋白:定性检测需显微镜观察,定量需专用仪器。
建议根据具体检测需求选择合适方法,并严格遵循操作规范以确保准确性。